Progreso de Semestre agosto 2008 (entrada Oct/25/08)

Este proyecto es uno continuo ya que hacemos mutaciones en once lugares fosforilados de una proteína. Con cada mutación se sigue una serie de pasos para confirmar si la mutación tiene algún efecto en el Nonsense Mediated Decay pathway.

La primera sección de mutaciones realizadas a sido completada un 90% ya que los resultados obtenidas de estas son los que presentare en ABRCMS meeting en Orlando. A la misma que se están haciendo más mutaciones desde dobles hasta quintuples, también en estas se siguen todos los pasos que se siguieron para la otra: se hace la mutación por PCR (site directed mutagenesis), se transfieren a E.Coli, se hace un miniprep y el resultado de este se manda a secuenciar, se transfiere a levadura, se hace una extracción de levadura, se realiza un Western blot y Northern blot.

El NMD es un mecanismo que regula las proteínas y gracias a este se degradan mutaciones que dañan las proteínas. Estas proteínas defectuosas son las que provocan el cáncer.

Con las mutaciones que se están realizando se está tratando de ver que efecto en el NMD tienen estos lugares fosforilados que se ha visto que están conservadas.

---