Terminando el semestre …
Este semestre a sido unico espesctacular para mi, ya que eh podido tener la oportunidad de hacer varias cosas que me abriran puerta en un futuro y ademas que me a expandido mi conocimiento. Una de esas a sido mi experiencia en el laboratorio del Dr. C. Gonzalez, lo cual trae detras a Bio- MINDS. Con los dos e logrado aprender tecnicas y conceptos que no conocia sobre el compo de la ciencia y tambien e aprendido cosas que me sirven para mi vida cotidiana y en general para la universidad.
Pero no siempre todo es perfecto pues para alcanzar una meta te tienes que tropesar para volver a levantrte con mas animo y lograr lo que quieres. de esta misma manera e tenido tropiesos, pocos, pero tropiesos.
Para el proximo semestre espero seguir en la misma investigacion, pero todavia unos planes en especifico no tengo porque durante el mes de verano surgiran mas interrogantes de las cuales yo no estare presentar para poderlas ver.
Tecnicas Aprendidas
En nuestro proyecto de investigacion seguimos una serie de pasos y protocolos para lograr nuestro objetivo que es tener cierta mutacion y verificar su efecto en la fosforilacion y desfosforilacion en el NMD. Dentro de todas las tecnicas que se realizan yo no las e hecho todas, e realizado la mayoria. Empezamos con un DNA con uno de los lugares que encontramos que es fosforilado por Upf1. A este se le lleva a un miniprep lo cual es una tecnica para hacer una extraccion de DNA, este queda concentrado en el sobrenadante. Luego a ese sobrenadante que tiene nuestro DNA le anadimos las mutaciones que creamos necesarias, asi creando desde simples Mutaciones hasta doble y triples. Pero de que nos sirven unos pocos, asi que se nos hara necesario tener mas para lo cual utilizamos el PCR. Este coje una polimerasa de DNA y la amplifica, pasamos a tener un monton de replicas del DNA deseado. Este proceso toma varias horas ya que lleva un ciclo bastante complejo. El primero desnaturaliza el DNA a 95 grados, pasa a “annealing”, enlongacion; estos tres pasos se repiten varias veces y cada uno conlleva varios minutos. Cuando termina procedemos a digerir el PCR en DpnI para proceder a transformar a E.Coli. Para la transformacion de E.Coli se utilizan las celulas competentes deseadas. Entonces volvemos a realizar un miniprep el cual se manda a secuenciar, esto se deja en un laboratorio de 2 a 3 dias; ahi lo que realizan es que verifican que las secuencias del DNA deseadas esten correctas para entonces nosotras transformar a levadura. Cuando se realiza todo esto se procede a hacer un Nothern Blot ( el cual yo no e realizado porque se utiliza radioactividad para lo cual yo no tengo licencia) y un Western Blot que nos detectar unas proteinas especificas en una muestra de una membrana. Para realizar esto se corre en una gel de agarosa la que separa y denatura la proteina por el largo de sus polipeptido. Luego se transfiere a una membrana donde se utilizan antibioticos especificos para obtener (identificar) la proteina. Si todo este proceso sale exitoso procedemos a hacer un extracto de proteina el cual es un proceso bastante largo. y aqui hemos completado un gran ciclo que nos permite entender y analizar para llegar a conclusiones efectivas para contestar nuestras preguntas
Visitando los bioblogs
Durante esotos dias pues me e dedicado a visitar diferentes blogs lo cual a sido una exelente experiencia, en ellos e vistos y aprendido varias cosas que no sabia que se podia hacer en los blogs. Si, soy nueva en esto de blogs y ademas no e logrado entenderlo mucho pero estoy tratando. Aqui e visto diferentes maneras de ponerlas fotos en los blogs, laminas y hasta “wallpapers” muy interesantes y bonitos. Ya veran que pronto el mio estara asi. Bueno,le dare enfacis a los tres blogs que me fueron asignados. Uno de ellos fue el de Rhodofago que es un estudiante de biotecnologia de la UPR del recinto de Mayaguez. En su proyecto el se encuentra trabajando con las bacterias y viruses. Evanelly otro miembro de biominds y la cual tambien trabaja con bacterias.
“Team Work”
Mi experiencia en el trabajo en equipo en el lab. del Dr. Carlos González a sido poca ya que empese este semestre. En este tiempo que a pasado e podido apresiar que los trabajadores del laboratorio, tanto los graduados como los subgraduados, tienen una buena química para trabajar entre ellos. El trabajo de cada uno es bastante individual pero ellos se ayudan y complementan unos con otros, cuando alguien no sabe realizar alguna técnica o tipo de experimento ponen de su tiempo para hacer lo que se encuentre en su alcance para ayudar. Yo cuando estoy haciendo algún experimento, cálculo o tarea la cual no tengo el conocimiento o estoy confundida cualquiera sin protestar se acercan y me explican lo mejor que se le es posible. Todo esto son factores que encuentro esenciales en el trabajo en equipo. También es impresindible que halla una buena comunicación. En el laboratorio e visto que este elemento se encuentra exelentemente puesto a práctica. Tenemos una reunión semanal de laboratorio donde se comparten varias puntos importantes y aquí cada cual aporta su opinión sobre el tema que se este discutiendo, todos escuchan y opinan respetuosamente. Si falta algo puede ser que fracasen como equipo, pues en el momento que alguien se cae hay que levantarlos todos juntos, pues cada uno somos indispensables para alcanzar las metas individuales y colectivas.
¿Qué investisgo?
La transcripción del DNA a un RNA mensajero (mRNA) y la traduccion del mRNA a una proteina son procesos altamente regulados por las celulas eucariotas. Nuestro laboratorio se enfoca en la regulacion a nivel post-transcripcional, hay varios mecanismos que se encargan de degradar los mRNAs defectuosos para evitar la produccion de proteinas daninas a la celula. Uno de estos mecanismos es el nonsense-mediated mRNA decay (NMD), este mecanismo se encarga de degradar los mRNAs que contienen codones de terminación prematura (PTC). Este mecanismo es necesario para evitar la produccion de proteínas dañinas a la célula que podrian causar enfermedades como el cancer. Se han identificado varios factores envueltos en este mecanismo como las proteinas Upf1, Upf2, Upf3. Estas proteinas son altamente conservadas en humanos, C. elegans, Drosophila, plantas y Saccharomyces cerevisiae. Estudios demuestran que Upf1 y Upf2 estan fosforiladas en humanos. Ademas, la fosforilacion y defosforilacion de Upf1 en humanos es necesaria para la activacion y desactivacion del mecanismo de NMD. Nuestro laboratorio ha demostrado que las proteinas Upf1 y Upf2 tambien estan fosforiladas en S. cerevisiae. Especificamente se han identificado 11 lugares de fosforilacion en UPF1. Actualmente estamos identificando el rol de estas fosforilaciones en el mecanismo de NMD, asi como en la terminacion de la traduccion.
